【摘要】
目的
了解
HBsAg
定量水平在慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、
HBsAg
阳性的原发性肝癌患者中的变化及其在
3
组患者中与
HBV DNA
的相关性。
方法
采集
47
例慢性乙型肝炎患者(乙型肝炎组),
72
例乙型肝炎肝硬化患者(肝硬化组)及
54
例肝癌患者(肝癌组)的血清标本,用雅培化学发光法进行
HBsAg
定量测定,荧光
PCR
定量法检测
HBV DNA
量水平。多组分析采用
Kruskal-Wallis
检验,两组间比较采用
Mann-Whitney U
检验,相关性分析采用
Spearman
检验。结果
HBsAg
定量值在乙型肝炎、肝硬化、肝癌组患者中的中位数分别为
2361.10
、
1001.64
、
594.35 IU/ml
,
3
组间呈逐渐下降趋势,χ
2 = 24.394
,
P < 0.05
,差异有统计学意义;乙型肝炎组与肝硬化组比较,
Z = -3.754
,
P < 0.05
,差异有统计学意义;乙型肝炎组与肝癌组比较,
Z =
-4.630
,
P < 0.05
,差异有统计学意义;而肝硬化组与肝癌组比较,差异无统计学意义。
HBeAg
阳性患者,
HBsAg
定量值在乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组患者的中位数分别为
3259.83
、
1077.30
、
789.72 IU/ml
,
3
组间呈下降趋势,χ
2 = 15.643
,
P < 0.01
,差异有统计学意义。对于
HBeAg
阴性患者,
HBsAg
定量值在乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组患者的中位数分别为
1669.00
、
1001.64
、
582.05 IU/ml
,
3
组间呈下降趋势,χ
2 = 6.423
,
P < 0.05
,差异有统计学意义。
HBV DNA
定量值在乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组患者的中位数分别为
5.3579
、
4.2207
、
1.0000 log10
拷贝
/ml
,
4
分位数间距分别为
(4.3579
~
6.8745)
、
(0.0000
~
5.7393)
、
(0.0000
~
4.6651) log10
拷贝
/ml
,
3
组
HBV DNA
定量值比较,χ
2 = 31.412
,
P < 0.05
,差异有统计学意义;
HBsAg
与
HBV DNA
在乙型肝炎组
( r = 0.297, P < 0.05 )
、肝硬化组
( r = 0.346
,
P < 0.05)
、肝癌组
( r = 0.452
,
P < 0.05)
均呈正相关。
结论
HBsAg
定量值在慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者中逐渐降低
,
且与
HBV DNA
水平正相关。
【关键词】
肝炎抗原,乙型;
肝炎病毒,乙型;
肝炎,乙型,慢性;
肝硬化;
肝细胞癌
The discrepancy of HBsAg titre and HBV DNA in patients with chronic hepatitis B, HBV-related liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma
PEI Yan-zhen, HAN Tao, MA Xiao-yan, LI Ying, XING Jing, SONG Zuo-li. Department of Hepatology, Third Central Hospital of Tianjin Medical University, Tianjin Institute of Hepatobiliary Disease, Tianjin Key Laboratory of Artificial Cells ,Tianjin 300170, China
Corresponding author: HAN Tao, Email:hantaomd@126.com
【
Abstract
】
Objective
To investigate the discrepancy of HBsAg titre and correlation of HBV DNA levels among patients with chronic hepatitis B (CHB), HBV-related liver cirrhosis (LC) and hepatocellular carcinoma (HCC). Methods
HBsAg titre and HBV DNA in serum samples were measured among 47 CHB, 72 LC and 54 HCC cases using Abbott chemiluminescence and fluorescence quantitative PCR, respectively. Statistical analyses among multiple groups, between two groups and about the correlation were performed using Kruskal-Wallis test, Mann-Whitney U test and Spearman test, respectively. Results
The median HBsAg titre level in serum samples decreased from 2361.10 IU/ml in CHB cohort to 1001.64 IU/ml in LC cohort and 594.35 IU/ml in HCC cohort, suggesting a statistically significant difference (x2 = 24.394, P < 0.05). Moreover, HBsAg titre in CHB group was significantly higher than that in LC group ( Z = -3.754, P < 0.05). CHB patients had significantly higher HBsAg titre than HCC cases ( Z = -4.630, P < 0.05). However, there was no statistically significant difference in HBsAg titre between LC and HCC group. Among HBeAg positive patients, HBsAg titre decreased from 3259.83 IU/ml in CHB group to 1077.30 IU/ml in LC group and 789.72 IU/ml in HCC group, indicating a significant difference (x2 = 15.643, P < 0.01). Among HBeAg negative patients, HBsAg titre declined from 1669.00 IU/ml in CHB group to 1001.64 IU/ml in LC group and 582.05 IU/ml in HCC group, suggesting of a significant difference (x2 = 6.423, P < 0.05). Positive correlation between HBsAg titre and HBV DNA was found in CHB ( r = 0.297, P < 0.05), LC( r = 0.346, P < 0.05) and HCC( r = 0.452, P < 0.05), respectively. Conclusion
HBsAg titre level in serum decreased progressively from CHB to LC and HCC group. There were positive correlations between HBsAg titre and HBV DNA level in CHB, LC and HCC.
【
Key words
】
Hepatitis B antigens;
Hepatitis B virus;
Hepatitis B, chronic;
Liver cirrhosis;
Hepatocellular carcinoma
在
HBV
感染患者的血清中,
HBsAg
亚病毒颗粒的含量远远超过具有感染性的成熟病毒颗粒,甚至在抗病毒药物有效的抑制病毒复制的情况下,
HBsAg
仍能持续不断的合成及分泌,提示
HBsAg
在
HBV
感染和致病机制中具有非常特殊的地位
[1]
。我们通过测定
HBsAg
定量在慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、肝癌患者中的水平,并分析其与
HBV DNA
的相关性,探讨
HBsAg
定量在慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、肝癌患者中的变化。
资料与方法
1.
研究对象:收集
2010
年
1
月
-2010
年
6
月天津市第三中心医院门诊和住院的慢性乙型肝炎患者
47
例(乙型肝炎组)、乙型肝炎肝硬化患者
72
例(肝硬化组),
HBsAg
为阳性的原发性肝癌患者
54
例(肝癌组),患者均未进行抗病毒治疗。其中慢性乙型肝炎及乙型肝炎肝硬化的诊断符合《慢性乙型肝炎防治指南》诊断标准
[2]
。肝癌诊断符合
2001
年中国抗癌协会肝癌专业委员会修订的《肝癌临床诊断标准》
[3]
。肝硬化及肝癌患者均为由慢性乙型病毒性肝炎引起的。
2.
测定方法:取患者空腹静脉血,在
4
℃下,离心半径
8 cm
,
3000 r/min
离心
15 min
,取上层血清检测。采用化学发光法,使用
ARCHITECT i2000SR
全自动免疫分析仪和
Abbott Architect HBsAg
试剂盒
(
购自美国雅培公司
)
检测
HBsAg
及
HBeAg
,其阳性参考范围:
HBsAg > 0.05 IU/ml
,
HBeAg > 1 mIU/ml
。对于第
1
次
HBsAg
检测值高于检测上限值
(250 IU/ml)
的样本,采用
HBsAg
专用稀释液按
l
∶
100
(
5
μ
l
血清加入
495
μ
l
稀释液
)
稀释,充分混匀后取双份上机检测,
HBsAg
定量结果由稀释比例及仪器测得结果计算所得,操作严格按试剂盒说明书进行。血清
HBV DNA
检测采用
ABI 7000
型荧光定量
PCR
仪(购自美国
ABI
公司)及
HBV DNA
荧光定量检测试剂盒(购自上海科华公司)。所有患者同日抽取静脉血,用罗氏
MODULAR-P-800
全自动生物化学分析仪及罗氏原装配套试剂(购自德国罗氏公司)检测
ALT
、总胆红素(
TBil
)、白蛋白(
Alb
)水平。
3.
统计学方法:用
SPSS13.0
统计软件进行数据分析,符合正态分布的数据用均数±标准差(
x
±
s
)表示。不符合正态分布的数据以中位数和
4
分位数间距
[M
(
QR
)
]
表示,多组分析采用
Kruskal-Wallis
检验,两组间比较采用
Mann-Whitney U
检验,相关性分析采用
Spearman
检验。
P < 0.05
为差异有统计学意义。
结
果
1.
一般情况:乙型肝炎组患者
47
例,男性
32
例,女性
15
例,平均年龄(
42.4
±
13.5
)岁,其中
HBeAg
阳性患者
24
例;肝硬化组患者
72
例,男性
56
例,女性
16
例,平均年龄(
51.9
±
9.7
)岁,其中
HBeAg
阳性患者
26
例;肝癌组患者
54
例,男性
43
例,女性
11
例,平均年龄(
58.3
±
9.8
)岁,其中
HBeAg
阳性患者
16
例。
2. HBsAg
定量在乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组患者中的比较:
HBsAg
定量值在乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组患者中的中位数分别为
2361.10
、
1001.64
、
594.35 IU/ml
,
4
分位数间距分别为(
975.69
~
5427.96)
、(
318.72
~
1819.99)
、
(133.75
~
1337.00) IU/ml
,
3
组间
HBsAg
定量值比较,χ
2 = 24.394
,
P < 0.05
,差异有统计学意义。乙型肝炎组与肝硬化组比较,
Z = -3.754, P < 0.05
,差异有统计学意义;乙型肝炎组与肝癌组比较,
Z = -4.630
,
P < 0.05
,差异有统计学意义;而肝硬化组与肝癌组比较,
Z = -1.720
,
P > 0.05
,差异无统计学意义。
对于
HBeAg
阳性患者,
HBsAg
定量值在乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组患者中的中位数分别为
3259.83
、
1077.30
、
789.72 IU/ml
,
4
分位数分别为(
1710.60
~
7547.85
)
IU/ml
、
(
374.39
~
2553.59
)
IU/ml
、(
162.97
~
1470.95
)
IU/ml
,
3
组
HBsAg
定量值比较,χ
2 = 15.643
,
P < 0.05
,差异有统计学意义。乙型肝炎组与肝硬化组比较,
Z = -3.088
,
P < 0.05
,差异有统计学意义;乙型肝炎组与肝癌组比较,
Z = -3.617
,
P < 0.05
,差异有统计学意义;而肝硬化组与肝癌组比较,
Z = -0.777
,
P > 0.05
,差异无统计学意义。
对于
HBeAg
阴性患者,
HBsAg
定量值在乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组患者的中位数分别为
1669.00
、
1001.64
、
582.05 IU/ml
,
4
分位数间距分别
为
(240.78
~
2920.97)IU/ml
、
(115.91
~
1609.59)IU/ml
、
(133.75
~
1209.07) IU/ml
,
3
组
HBsAg
定量值比较,χ
2 = 6.423
,
P < 0.05
,差异有统计学意义。乙型肝炎组与肝癌组比较,
Z = -2.277
,
P < 0.05
,差异有统计学意义;而乙型肝炎组与肝硬化组比较,
Z = -1.693
,
P > 0.05
,差异无统计学意义;肝硬化组与肝癌组比较,
Z = -1.456
,
P > 0.05
,差异无统计学意义。
在乙型肝炎组中,
HBeAg
阳性和阴性患者
HBsAg
定量值比较,
Z = -2.341
,
P < 0.05
,差异有统计学意义;而在肝硬化组、肝癌组中,
HBeAg
阳性和阴性患者
HBsAg
定量值比较,
Z
值分别为—
0.785
、—
0.966
,
P
值均
> 0.05
,差异无统计学意义。
3. HBV DNA
定量值在乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组患者中的比较:
HBV DNA
定量值在乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组患者的中位数分别为
5.3579
、
4.2207
、
1.0000 log10
拷贝
/ml
,
4
分位数间距分别为
(4.3579
~
6.8745)
、
(0.0000
~
5.7393)
、
(0.0000
~
4.6651) log10
拷贝
/ml
,
3
组
HBV DNA
定量值比较,χ
2 = 31.412
,
P < 0.05
,差异有统计学意义;乙型肝炎组与肝硬化组比较,
Z = -3.769
,
P < 0.05
,差异有统计学意义;肝硬化组与肝癌组比较,
Z = -2.281
,
P < 0.05
,差异有统计学意义,乙型肝炎组与肝癌组比较,
Z = -5.493
,
P < 0.05
,差异有统计学意义。
4. HBsAg
与
HBV DNA
的相关性分析结果:
HBsAg
定量与
HBV
DNA
定量在乙型肝炎组(
r = 0.297, P = 0.043
)、肝硬化组(
r =0.346
,
P = 0.003
)、肝癌组(
r = 0.452
,
P = 0.001
)患者中均呈正相关性。
此外,对于
HBeAg
为阳性的患者,
HBsAg
定量与
HBV
DNA
定量在乙型肝炎组(
r = 0.482
,
P = 0.020
)、肝硬化组(
r = 0.403
,
P = 0.041
)及肝癌组患者中(
r = 0.533
,
P = 0.034
)均呈正相关性;对于
HBeAg
为阴性的患者,两者在乙型肝炎组中无相关性(
r = 0.068
,
P
= 0.753
),但在肝硬化组(
r = 0.303
,
P = 0.041
)及肝癌组(
r = 0.394
,
P = 0.014
)中均呈正相关性。
5. HBsAg
定量在乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组患者中与
ALT
、
TBil
、
Alb
的相关性分析:在乙型肝炎、肝硬化及肝癌组患者中,
ALT
、
TBil
及
Alb
分别为
81.5 U/L
、
13.40
μ
mol/L
、(
40.6
±
9.5
)
g/L
,
45.0 U/L
、
31.95
μ
mol/L
、(
32.1
±
7.0
)
g/L
,
38.5U/L
、
30.10
μ
mol/L
、(
33.0
±
6.6
)
g/L
,与
HBsAg
定量值均无相关性
( P
值均
> 0.05)
。在乙型肝炎组中,
ALT
、
TBil
、
Alb
与
HBsAg
定量的
r
值分别为
0.208
、
0.073
、
0.015
;在肝硬化组中,
r
值分别为
0.246
、
0.031
、
0.221
;在肝癌组中,
r
值分别为
0.192
、
0.024
、
0.009
。
讨
论
化学发光法在测定
HBsAg
定量方面比酶联免疫法更准确、快速、有效
[4]
。本组资料采用雅培化学发光法测定
HBsAg
定量,研究其在慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者间水平的变化,增加了实验结果的准确性,
结果显示,
HBsAg
定量在乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组患者中逐渐下降,
3
组比较,差异有统计学意义,且乙型肝炎组
HBsAg
定量中位数显著高于其他两组。
HBV DNA
在乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组患者中也呈逐渐下降趋势,两两比较,差异均具有统计学意义,与
Wong
等
[5]
的观点一致,随着慢性
HBV
感染性疾病病程延长及病情发展,病毒复制的活性减低,可能是由于机体感染
HBV
后,机体体液和细胞免疫应答造成肝细胞损害,免疫损伤越严重,肝细胞破坏程度也越严重,因此造成大量肝细胞坏死,从而导致依赖于肝细胞的乙型肝炎病毒复制减少。
HBsAg
也是依赖于肝细胞产生的,肝细胞的破坏也导致
HBsAg
随着疾病的进展逐渐下降。
本组资料中,乙型肝炎组
HBsAg
定量与
HBV DNA
呈正相关性,
与
Thompson
等
[6]
的研究结果一致。
HBsAg
定量与
HBV DNA
呈相关性可能是由于两者均有赖于肝细胞产生,它们都以
cccDNA
为模板合成,组合成完整的病毒颗粒后分泌至血液中。
HBsAg
定量与
HBV
DNA
存在相关性说明
HBsAg
定量在一定程度上可反映
HBV
DNA
的复制情况。
HBsAg
定量与
HBV DNA
的相关性不是绝对平行的,不同时期的患者,两者的相关性是不同的。在
HBeAg
为阴性的患者中,
HBsAg
定量与
HBV DNA
相关性低于
HBeAg
阳性患者,且
HBsAg
定量在乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组患者中均低于
HBeAg
阳性时
HBsAg
在
3
组患者中的定量值。在乙型肝炎组中,
HBsAg
定量值在
HBeAg
阴性及阳性患者中差异有统计学意义,此结果与文献
[7-9]
一致。
HBsAg
定量的差异,可能是由于
HBeAg
阴性的乙型肝炎患者肝内的
cccDNA
水平通常较低
[10]
,而
HBeAg
阳性的乙型肝炎患者体内
HBV
仍有较高水平的复制。与
HBeAg
阳性患者比较,
HBsAg
定量与
HBV DNA
相关性在
HBeAg
阴性患者中减弱,可能是由于乙型肝炎病毒基因整合进入宿主基因组,整合的基因尽管不能提供
HBV DNA
复制的模板,但并不影响
HBsAg
的产生
[11]
。
本组资料发现,
HBsAg
定量及
HBV DNA
在乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组中均呈逐渐下降趋势,按照
HBeAg
阳性、阴性分组后,这种趋势依然存在。在
3
组中,
HBeAg
阳性患者
HBsAg
定量值均高于
HBeAg
阴性患者。
HBsAg
定量与
HBV DNA
定量在
3
组中均存在正相关性,但在
3
组中,
HBeAg
阳性组两者的相关性均高于
HBeAg
阴性组。
参
考
文
献
[1]
Ganem D, Prince AM. Hepatitis B virus infection--natural history and clinical consequences.
N Engl J Med, 2004, 350: 1118-1129.
[2]
Chinese Society of Hepatology and Chinese Society of Infectious Diseases, Chinese Medical Association. The guideline of prevention and treatment for chronic hepatitis B. Zhonghua Ganzangbing Zazhi, 2005, 13: 881-891. (in Chinese)
中华医学会肝病学分会、感染病学分会
.
慢性乙型肝炎防治指南
.
中华肝脏病杂志
, 2005, 13: 881-891.
[3]
Society of Liver Cancer, Chinese Anti-cancer Assciation. Criteria of the clinical diagnosis and staging for primary liver carcinoma. Zhonghua Ganzangbing Zazhi, 2001, 9: 324. (in Chinese)
中国抗癌协会肝癌专业委员会
.
原发性肝癌的临床诊断与分期标准
.
中华肝脏病杂志
, 2001, 9: 324.
[4]
Ismail N, Fish GE, Smith MB. Laboratory evaluation of a fully automated chemiluminescence immunoassay for rapid detection of HBsAg, antibodies to HBsAg, and antibodies to hepatitis C virus. J Clin Microbiol, 2004, 42: 610-617.
[5]
Wong DK, Yuen MF, Poon RT, et al. Quantification of hepatitis B virus covalently closed circular DNA in patients with hepatocellular carcinoma. J Hepatol, 2006, 45: 553-559.
[6]
Thompson AJ, Nguyen T, Iser D, et al. Serum hepatitis B surface antigen and hepatitis B e antigen titers: disease phase influences correlation with viral load and intrahepatic hepatitis B virus markers. Hepatology, 2010, 51: 1933-1944.
[7]
Jaroszewicz J, Calle Serrano B, Wursthorn K, et al. Hepatitis B surface antigen (HBsAg) levels in the natural history of hepatitis B virus (HBV)-infection: a European perspective. J Hepatol, 2010, 52: 514-522.
[8]
Nguyen T, Thompson AJ, Bowden S, et al. Hepatitis B surface antigen levels during the natural history of chronic hepatitis B: a perspective on
Asia. J Hepatol, 2010, 52: 508-513.
[9]
Galli C, Orlandini E, Penzo L, et al. What is the role of serology for the study of chronic hepatitis B virus infection in the age of molecular biology? J Med Virol, 2008, 80: 974-999.
[10]
Wursthorn K, Lutgehetmann M, Dandri M, et al. Peginterferon alpha-2b plus adefovir induce strong cccDNA decline and HBsAg reduction in patients with chronic hepatitis B. Hepatology, 2006, 44: 675-684.
[11]
Thomas HC, Lemon SM. Viral Hepatitis. 3th ed.
Boston,
MA:Blackwell, 2005: 308-322. |